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Procedimiento

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1. Extraer una de las placas Petri con el disco de cartón nutriente en su interior, de una de las bolsas estériles que hay en la caja, cuidando de cerrar nuevamente la bolsa con papel  celo para que no pierda esterilidad.

2. Humectar uniformemente el disco de cartón nutriente con agua destilada estéril, en una cantidad de 3 a 3,5 ml. Una forma cómoda es la utilización de la jeringa dosificadora M&S que, provista de un portafiltros de un solo uso, proporciona el agua estéril necesaria. La cantidad de ésta varía según el medio y la temperatura de incubación.

3. Filtracion: Disponemos de un embudo donde realizaremos la operación principal de nuestro trabajo. Este instrumento sirve, pues, como soporte del filtro de membrana que retendrá los microorganismos.

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4. Sacar el filtro de membrana de la bolsita estéril, desechando la hoja protectora azul, con unas pinzas esterilizadas.

Colocar el filtro en la frita del aparato previamente flameado para evitar contaminación.

Colocar la parte superior del  embudo también flameada. Conectar el vacío.

 

5. Verter en el embudo los 100 ml de agua problema. Abrir el grifo del aparato y filtrar toda el agua a través de la membrana, hasta que quede completamente seca.

Retirar la parte superior del embudo; retirar la membrana con unas pinzas esterilizadas y colocarlo encima del cartón nutriente que está en la placa Petri.

Precaución: al colocar el filtro de membrana se ha de evitar que se formen burbujas o bolsitas de aire, que impedirían el acceso de la sustancia nutriente.

6. Señalizar  o marcar la placa de Petri con la anotación pertinente para su identificación.

Poner a incubar con la tapa hacia arriba. Hay que llevar cuidado con que el agua no absorbida por el cartón nutriente no lave la membrana

Enjuagar el aparato con agua estéril antes de volver a hacer una filtración.

Aviso:  Crecimiento y reacción positiva en medios selectivos se han de considerar como sospecha. Para un diagnóstico seguro son necesarias otras diferenciaciones adicionales, p. ej., con muestreo aleatorio, teniendo en cuenta la legislación vigente. En caso de precisar más detallada información para la utilización de los discos de cartón nutrientes, rogamos nos consulten.

 

En el marco de nuestra elaboración conforme a las normas GMP, garantizamos controles de crecimiento y esterilidad.

 

Procedimiento para medio cultivo DRCM :

caldo deshidratado con tapon anaerobio para la determinacion de clostridios sulfitorreductores

 

1. Verter 20 ml de agua problema en el tubo que contiene el medio nutriente.

                                                

2. Enroscar ligeramente (¡sin llegar a apretar del todo, para posibilitar la salida de gases que eventualmente se produzcan!) y calentar durante 10 minutos al Baño María a unos 80 ºC (no ocurre nada si se supera esta temperatura y echa a hervir), con lo que mueren los gérmenes vegetativos, mientras que las esporas perduran.

 

3. Se deja enfriar. La parafina que contiene el tubito habrá subido hacia arriba, formando un tapón que garantizará el cultivo en condiciones anaeróbicas.

 

4. Se incuba el cultivo durante 24 horas a 37 ºC.

 

5. Si la prueba es positiva, el tubito adquirirá un color negruzco y tendrá olor a sulfuro de hidrógeno (huevos podridos).

 

Nota: para poder hacer una  observación del aspecto que realmente debe adquirir en caso positivo, basta con añadir una vez, al  principio, un grumo de tierra de jardín del tamaño de un garbanzo.

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