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Procedimiento
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1. Extraer una
de las placas Petri con el disco de cartón nutriente en su interior, de una
de las bolsas estériles que hay en la caja, cuidando de cerrar nuevamente la
bolsa con papel celo para que no
pierda esterilidad. |
2.
Humectar uniformemente el disco de cartón nutriente con agua destilada
estéril, en una cantidad de 3 a 3,5 ml. Una forma cómoda es la utilización de
la jeringa dosificadora M&S que, provista de un portafiltros de un solo
uso, proporciona el agua estéril necesaria. La cantidad de ésta varía según
el medio y la temperatura de incubación. |
3. Filtracion:
Disponemos de un embudo donde realizaremos la operación principal de nuestro
trabajo. Este instrumento sirve, pues, como soporte del filtro de membrana
que retendrá los microorganismos. |
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4. Sacar el
filtro de membrana de la bolsita estéril, desechando la hoja protectora azul,
con unas pinzas esterilizadas. Colocar
el filtro en la frita del aparato previamente flameado para evitar
contaminación. Colocar
la parte superior del embudo también
flameada. Conectar el vacío. |
5.
Verter en el embudo los 100 ml de agua problema. Abrir el grifo del aparato y
filtrar toda el agua a través de la membrana, hasta que quede completamente
seca. Retirar
la parte superior del embudo; retirar la membrana con unas pinzas
esterilizadas y colocarlo encima del cartón nutriente que está en la placa
Petri. Precaución:
al colocar el filtro de membrana se ha de evitar que se formen burbujas o
bolsitas de aire, que impedirían el acceso de la sustancia nutriente. |
6.
Señalizar o marcar la placa de Petri
con la anotación pertinente para su identificación. Poner
a incubar con la tapa hacia arriba. Hay que llevar cuidado con que el agua no
absorbida por el cartón nutriente no lave la membrana Enjuagar
el aparato con agua estéril antes de volver a hacer una filtración. |
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Aviso: Crecimiento y reacción positiva en medios selectivos
se han de considerar como sospecha. Para un diagnóstico seguro son necesarias
otras diferenciaciones adicionales, p. ej., con muestreo aleatorio, teniendo
en cuenta la legislación vigente. En caso de precisar más detallada
información para la utilización de los discos de cartón nutrientes, rogamos
nos consulten. En
el marco de nuestra elaboración conforme a las normas GMP, garantizamos
controles de crecimiento y esterilidad. |
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Procedimiento para
medio cultivo DRCM : caldo deshidratado
con tapon anaerobio para la determinacion de clostridios sulfitorreductores 1.
Verter 20 ml de agua problema en el tubo que contiene el medio nutriente. 2.
Enroscar ligeramente (¡sin llegar a apretar del todo, para posibilitar la
salida de gases que eventualmente se produzcan!) y calentar durante 10
minutos al Baño María a unos 80 ºC (no ocurre nada si se supera esta
temperatura y echa a hervir), con lo que mueren los gérmenes vegetativos,
mientras que las esporas perduran. 3.
Se deja enfriar. La parafina que contiene el tubito habrá subido hacia
arriba, formando un tapón que garantizará el cultivo en condiciones
anaeróbicas. 4.
Se incuba el cultivo durante 24 horas a 37 ºC. 5.
Si la prueba es positiva, el tubito adquirirá un color negruzco y tendrá olor
a sulfuro de hidrógeno (huevos podridos). Nota: para poder hacer una observación del aspecto que realmente debe adquirir en caso positivo, basta con añadir una vez, al principio, un grumo de tierra de jardín del tamaño de un garbanzo. |
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